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克隆反应注意事项
发布人:viking2000    浏览 2271 次    时间:2012年12月19日    
  1. 引物不能磷酸化。
  2. 对于TA克隆,引物5’端第一个碱基尽量使用G/C。   
    TA 克隆,只能用Taq系列的酶;平端克隆,使用产生平端的酶。  
  3. PCR 产物如有杂带,凝胶回收,但不要在UV 下暴露时间太长,较长时间损伤DNA,影响克隆效率。  
  4. 根据PCR 产物的强弱,增减PCR 产物的量(0.5-4μl),但是载体使用量不变。  
  5. 反应温度不能低于20℃。  
  6. 反应时间绝对不能超过30分钟。  
  7. 总反应体积不能超过5μl。  
  8. 随着克隆片段的增加(>3 kb),克隆效率降低
,
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发布人:viking2000 发布时间:2012年12月19日已被浏览 2271
 
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