欢迎来到志宏生物网站! 加入收藏 | 联系我们
   常用品牌:   Biosharp
   
新闻动态
技术文档
产品促销
 首页  >  新闻资讯  >  信息正文
克隆常见问题分析
发布人:viking2000    浏览 1679 次    时间:2012年12月19日    
一、克隆效率低  
      影响克隆效率有许多因素,如扩增目的基因所用引物,基因的结构,插入片段和载体的比例等。如发现克隆效率低,尝试用下列方法提高克隆效率。 
  • 纯化PCR 产物。
  • 如插入片段的浓度太低,增加插入片段的量。
  • 用新鲜的PCR产物,不要冷冻PCR 产物。由于3’-A 热力学不稳定,产物应放置在4℃,并在1~2天内完成克 隆反应。 
  • 使用能产生3’ 末端 “A”的DNA聚合酶 (例如 Taq DNA 聚合酶)。 
  • 重新设计引物,5’ 端包含“G”或“C”,以提高PCR 产物3’ 末端“A”的效率。 
二、PCR 鉴定重组子失败 
      当用PCR 方法鉴定重组子,没有得到目的扩增产物,又没有载体自连,说明PCR反应失败。重新优化PCR 反应条件或提取质粒,以质粒作模板扩增或酶切鉴定包含重组子的克隆。

三、重组克隆呈现淡蓝色或“fish eye”  
     这是由于插入片段没有影响lacZ 基因读码框, 或插入片段太小,这种情况下菌落呈现淡蓝色。
,
上一条:核酸、蛋白质的各种换算
下一条:克隆反应注意事项
发布人:viking2000 发布时间:2012年12月19日已被浏览 1679
 
 志宏生物新闻中心加入志宏网上商城友情链接 
公司简介
经销品牌
代理品牌
公司新闻
技术支持
促销信息
联系我们
   Biosharp
版权所有:合肥志宏生物技术有限公司    备案号:皖ICP备09019202号