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重组细胞因子溶解小帖士
发布人:viking2000    浏览 1969 次    时间:2012年8月9日    

1.离心(Centrifuge):高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。

2.溶解(Reconstitution):用去离子水或其它缓冲液(根据说明书要求进行选择)溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/ml)。溶解时不可振荡,避免因化学键的断裂造成蛋白失活,可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间,待细胞因子完全溶解后使用。溶剂的选择:
1)要求用去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度。

3.分装和贮存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液,稀释可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周,如需长期保存,最好在稀释液中加入10%的FCS(小牛或胎牛血清)或0.1 %的BSA(牛血清白蛋白)或5% HAS(人血清白蛋白)来稳定蛋白,然后需分装冻存于-20℃ (注意:不可冻存于-50℃以下)。分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量,以实现每次实验用完一支工作液,避免反复冻融引起蛋白活性的降低。

细胞因子量极微,所以严谨的操作是必需的,任何不适当的溶解都会造成实验的失败,造成大量的浪费。请谨慎操作!

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发布人:viking2000 发布时间:2012年8月9日已被浏览 1969
 
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